雜交瘤細(xì)胞在保存過程中存在抗體基因丟失、細(xì)胞狀態(tài)不好影響抗體產(chǎn)生，甚至細(xì)胞死亡的情況，為將優(yōu)秀抗體長(zhǎng)期保存、穩(wěn)定生產(chǎn)，可將雜交瘤細(xì)胞中的抗體基因提取并測(cè)序，最終拿到核苷酸序列，并以 DNA 形式保存，用于后期外源表達(dá)及生產(chǎn)。雜交瘤細(xì)胞抗體測(cè)序所獲取的雜交瘤細(xì)胞單克隆抗體基因序列，是發(fā)表文章或?qū)＠仨毿畔⒑椭亟M表達(dá)工程抗體的前提之一，同時(shí)也是抗體人源化工作的基礎(chǔ)。
我公司利用RACE（Rapid Amplification of cDNA Ends)技術(shù)和公司特有的抗體特異引物集進(jìn)行雜交瘤抗體基因測(cè)序。通過利用Illumina Miseq測(cè)序平臺(tái)，能夠低成本和短周期的完成序列測(cè)序工作，得到準(zhǔn)確的抗體VDJ基因序列。
雜交瘤抗體基因測(cè)序服務(wù)流程
雜交瘤抗體基因測(cè)序送樣要求
- 提供數(shù)量>1×10^6經(jīng)Trizol處理的細(xì)胞，處理方法如下：
- 將培養(yǎng)的細(xì)胞和上清進(jìn)行吹打，細(xì)胞量不少于1×10^6，要活細(xì)胞且狀態(tài)良好；
- 收到細(xì)胞，離心，棄上清留沉淀，根據(jù)細(xì)胞量加1-2ml Trizol （1×10^6加1mL，5×106-1×10^7加2mL,1×10^8加3mL），-80℃保存，準(zhǔn)備提 RNA；
- 提供雜交瘤細(xì)胞種屬來源信息及抗體亞型信息；
雜交瘤抗體基因測(cè)序周期和交付結(jié)果
- 交付周期：3-5個(gè)工作日
- 交付內(nèi)容：
- 100%準(zhǔn)確的抗體重鏈及輕鏈VDJ全長(zhǎng)氨基酸和核酸序列；
- VDJ全長(zhǎng)序列對(duì)應(yīng)的FR1/2/3/4, CDR1/2/3注釋信息；
- Word及PDF版的分析報(bào)告，方便項(xiàng)目匯報(bào)和歸檔 ；
雜交瘤抗體基因測(cè)序服務(wù)優(yōu)勢(shì)
- 3-5個(gè)工作日急速交付測(cè)序結(jié)果，加速單克隆抗體基因序列發(fā)現(xiàn)和研究生產(chǎn)速度；
- 采用特有的5′ RACE擴(kuò)增技術(shù)，大大提升序列測(cè)序成功率，并能獲得單克隆基因的所有序列信息；
- 采用高通量測(cè)序方法可高效對(duì)抗體基因重輕鏈可變區(qū)序列進(jìn)行測(cè)序；
- 經(jīng)驗(yàn)豐富的引物設(shè)計(jì)及抗體基因分析能力；
- 多種屬（人，小鼠，大鼠，兔等）多亞型（IgG1, IgG2a, IgG2b, IgM 等）抗體均可進(jìn)行基因提取；
- 可提供從雜交瘤抗體基因測(cè)序 — 抗體基因合成— 序列密碼子優(yōu)化 — 抗體蛋白表達(dá)— 抗體蛋白親和力驗(yàn)證等整體服務(wù)；
