10x Genomics最新的Chromium系統(tǒng)利用油包水的微反應(yīng)體系,通過序列標(biāo)簽區(qū)別群體中的不同細(xì)胞,獲得單細(xì)胞水平的表達(dá)譜數(shù)據(jù),可實(shí)現(xiàn)數(shù)千甚至數(shù)萬個(gè)單細(xì)胞群體分析。該平臺(tái)通過油滴-barcode-單細(xì)胞的對(duì)應(yīng)關(guān)系,實(shí)現(xiàn)真正意義上的單細(xì)胞測(cè)序,單個(gè)樣本細(xì)胞檢測(cè)數(shù)最高可達(dá)1000-10000個(gè),其所建的文庫與Illumina各種型號(hào)的平臺(tái)高度兼容。
單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)給抗體篩選帶來了重大變革。利用該技術(shù)可以從病人外周血淋巴細(xì)胞中獲得抗原特異性的單個(gè)記憶性B細(xì)胞,并針對(duì)單個(gè)細(xì)胞的抗體的重鏈 和輕鏈進(jìn)行RT-PCR,從而獲得人源的單克隆抗體。單個(gè)B細(xì)胞測(cè)序技術(shù)可以快速、高效地分離鑒定出抗原特異性的中和抗體,具有廣闊的應(yīng)用前景。
下圖展示了基于10X Chromium單細(xì)胞平臺(tái)進(jìn)行抗體VDJ基因序列建庫的流程圖。
目前,利用單個(gè)B細(xì)胞測(cè)序技術(shù)已經(jīng)篩選和鑒定出多種病毒的中和抗體。Scheid等利用FACS法從感染艾滋病毒的患者中分離到對(duì)HIV抗原有親和力的記憶性B細(xì)胞,并從中篩選到大量的HIV-1特異性的中和抗體。Tsioris等通過單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)從人B細(xì)胞中鑒定出針對(duì)西尼羅河病毒的中和抗體。Wang等[34]從中國寨卡康復(fù)病人體內(nèi)鑒定出高效、特異的寨卡病毒單克隆抗體。該抗體能在小鼠模型上有效治療寨卡病毒感染,有望成為治療寨卡病毒感染的候選藥物。類似地,Cox 等從人抗原特異性記憶B細(xì)胞中篩選到登革病毒的中和抗體。
]]>